AbstraktOSN-E

Lidský choriogonadotropin (hCG) patøí do skupiny hormonù, které mají vztah k nádorovému onemocnìní germinativního pùvodu a gestaèním trofoblastickým chorobám. hCG byl popsán v moèi tìhotných žen již pøed více než 70 lety, v tìhotenství má význam spolu s AFP pro charakterizaci patologického tìhotenství (Downùv syndrom, trisomie 21). Je to glykoprotein, vznikající v trofoblastických buòkách placenty. S dalšími glykoproteinovými hormony lutropinem (LH), folitropinem (FSH) a thyreotropinem (TSH), které jsou adenohypofyzárního pùvodu, má podobnou strukturu alfa–podjednotky. Biologickou specificitu tìchto hormonù podmiòuje pøedevším beta–podjednotka.

OSN-SChemická a fyzikální charakteristika, struktura a povaha analytuOSN-E

KEY-SGlykoprotein hCGKEY-E má molekulovou hmotnost 36,7 kDa, je tvoøen dvìma rozdílnými podjednotkami: alfa (14,5 kDa) a beta (22,2 kDa).  KEY-Salfa–podjednotka hCGKEY-E se skládá z 92 aminokyselin, kromì krátké N–terminální oblasti je její složení podobné pro hormony adenohypofýzy i placenty. KEY-Sbeta–podjednotka hCGKEY-E  je tvoøena 145 aminokyselinami, vykazuje nejvìtší homologii s LH, se kterým má shodný receptor. Je známa sekundární a terciární struktura hormonu: intercysteinové vazby vytváøejí na alfa- i beta-podjednotce mùstky, které se podílejí na jejich interakci, event. vazbì k receptorùm. Je známa vazba sacharidù prostøednictvím N– i O–glykosidické vazby. Hormon byl pøipraven v krystalické formì (Tyrey 1995).

OSN-SRole v metabolismuOSN-E

V prvních 6 týdnech gravidity udržuje hCG žluté tìlísko, podporuje produkci progesteronu a dále estrogenu. Význam  KEY-Sprodukce hCGKEY-E  v tìhotenství je dosud nejasný, pravdìpodobnì se úèastní i na vzniku imunotolerance plod – matka.

OSN-SZdroj (syntéza, pøíjem)OSN-E

V prùbìhu gravidity produkuje hCG trofoblast placenty. Pøedpokládá se, že syntéza každé podjednotky je nezávislá, rychlost tvorby nativního dimeru je v pozdìjších stadiích tìhotenství úmìrná množství beta–podjednotky, která je syntetizovaná v limitujícím množství. U trofoblastických nebo germinativních nádorù se objevuje zvýšený molární pomìr beta–podjednotky.

OSN-SDistribuce v organismu, obsah ve tkáníchOSN-E

Fyziologicky je hCG syntetizován placentou ihned po poèetí. Hladiny v mateøské krvi dosahují hodnot 10, 60 a 140 IU/l v 6., 8. a 12 týdnu tìhotenství. Mezi 14–18.týdnem se jeho koncentrace ustalují na hodnotì 10–50 IU/l a pøetrvávají až do porodu. Po porodu hodnoty klesají na koncentrace do 5 IU/l. Podíl volné beta–podjednotky v séru klesá v prùbìhu tìhotenství ze 3 na asi 1 %. Zdrojem hCG u zdravých osob je pravdìpodobnì hypofýza. Citlivými technikami bylo prokázáno, že beta–hCG je pøítomen na membránách vìtšiny bunìk maligních nádorù. Z toho lze pøedpokládat, že by mohl být universálním tumorovým markerem.

OSN-SZpùsob vyluèování nebo metabolismusOSN-E

Pøibližnì 20 % intaktního hCG uvolnìného do krevního obìhu se dostává do moèe, zbytek podléhá metabolické degradaci. První KEY-Sdegradaèní krok hCGKEY-E  spoèívá ve ztrátì peptidové vazby (”nicking”) mezi aminokyselinami 44 a 45 nebo 47 a 48 beta–podjednotky, èímž dojde ke zmìnì biologických vlastností hormonu. Disociace alfa a beta–podjednotky je dalším možným krokem degradace. Beta–podjednotka mùže být dále štìpena až na  KEY-Sbeta–core fragmentKEY-E , složený z peptidù o aminokyselinové sekvenci 6–40 a 55–92 navzájem spojených disulfidickými mùstky, s limitovaným množstvím sacharidové složky.

Fyziologická variabilitaOSN-E

Nejvyšší hladiny hCG byly nalezeny u postmenopauzálních žen, koncentrace v séru zdravých mužù jsou asi tøetinové. Referenèní rozmezí závisí na použité metodì, obvykle se za diskriminaèní hranici považuje 5 IU/l.

OSN-SPatofyziologické mechanismy ovlivòující koncentraciOSN-E

Koncentrace KEY-ShCG v séruKEY-E  mohou být ovlivnìny pøedevším za tìhotenství (mnohoèetná gravidita, hrozící potrat, mimodìložní tìhotenství). Zdrojem zvýšených koncentrací hCG mohou být dále nádory germinativního a trofoblastického pùvodu.

OSN-SPøímé následky abnormálních koncentrací

V experimentech na zvíøatech byla prokázána tvorba protilátek, tzv.”protitìhotenská vakcina”, namíøená proti epitopùm hCG, která tlumí rùst tumorù experimentálních zvíøat. OSN-E

OSN-SZnaky analytické metodyOSN-E

Koncentrace v séru èi v moèi jsou vyjádøeny ve vztahu k mezinárodnímu standardu (obvykle WHO 3. International Standard 75/537).Metodiky vyšetøení hCG mohou být ovlivnìny nìkolika faktory: protilátky proti hCG mohou detekovat rozdílné epitopy na rùzných formách molekuly hCG (jsou popsány epitopy pøíslušející pouze podjednotce beta èi alfa, nebo obìma složkám zároveò). Podle typu protilátky jsou tedy detekovány tyto  KEY-Stypy hCG vyšetøeníKEY-E : celkový beta–hCG (tj.intaktní hormon-dimer + volná podjednotka beta), intaktní hCG (dimer bez volné podjednotky beta), pouze volná podjednotka beta nebo beta–core fragment (stanovení v moèi). Všechny protilátky mohou navíc charakterizovat nativní, ev. nickovanou èi jinak modifikovanou molekulu. Rozdíly v imunochemickém systému, znaèení, senzitivitì a aviditì protilátek mohou zpùsobovat nesoumìøitelnost vyšetøení provedených soupravami rùzných výrobcù.

Je-li pro vyšetøení užita metoda nezahrnující stanovení volné beta–podjednotky, mùže být zvýšení jejího podílu pøedevším v patologických stavech podhodnoceno. Naopak stanovení pouze samotné volné beta–podjednotky je ovlivnìno nestabilitou intaktního dimeru: jak pøi pokojové teplotì, tak pøi 4^o C hladina volné beta–podjednotky narùstá, pøedevším ve vzorku plné krve. Vzhledem k tomu, že  KEY-Spodíl volné beta–podjednotkyKEY-E  tvoøí asi 1 % z celkového intaktního hCG, pak uvolnìní malého množství této podjednotky disociací dimeru mùže výraznì zvýšit hladinu volné beta–složky.

OSN-SPoužití pro klinické úèelyOSN-E

Maligní onemocnìní

·          KEY-SScreening hCGKEY-E  v séru: pouze monitorování symptomatických osob podobnì jako AFP – tj. u osob s podezøením na germinativní nádory varlat (nesestouplé varle, nádor testes u sourozence – dvojèete).

·         Stanovení diagnózy: pøi urèení neznámého primárního nádoru (spolu s dalšími markery).

·         Stanovení závažnosti onemocnìní: koncentrace hCG mají význam pro zhodnocení stadia onemocnìní, ev. postižení mízních uzlin pøed terapií.

·         Stanovení diagnózy: pro potvrzení histologické charakterizace nádorù testes (pøedevším neseminomù) a choriokarcinomù, ev. hydatidózní nebo invazivní moly.

·         Monitorování prùbìhu onemocnìní: má velký význam pro sledování nemocných s nádory testes za úèelem prùkazu relapsu èi ovìøení úèinnosti terapie.  KEY-SSenzitivita hCGKEY-E  pro neseminomy se pohybuje kolem 50 %, pro seminomy 10–20 %. Témìø 100 % senzitivitu lze nalézt pro choriokarcinomy. Senzitivita pro další lokalizace nádorù (pankreas, GIT, plíce, mamma, ledviny, moèový mìchýø) se pohybuje obvykle kolem 10– 20 %.

Benigní onemocnìní, jiné pøíèiny falešné pozitivity v séru

Zvýšené hodnoty jsou nacházeny pøi fyziologickém i patologickém tìhotenství, u žen s myomy nebo s ovariálními cystami.

OSN-SBiologický poloèasOSN-E

Aktivní intaktní hormon má poloèas 40 hod, štìpený 11 hod, volná alfa–podjednotka 1,5 hod, volná beta–podjednotka 4 hod, beta–core fragment ménì než 10 min.

OSN-SKontrolní (øídící) mechanismyOSN-E

Kontrolní  KEY-Smechanismy sekrece hCGKEY-E  nejsou zatím zplna objasnìny, je však zøejmé, že cyklický AMP, prolaktin a kortikosteroidy mohou sekreci stimulovat, progesteron a estradiol potlaèit.

Je známo 6 genù, lokalizovaných na lidském chromozomu 19, které kódují beta–podjednotku, v placentì jsou exprimovány pouze 2 z nich.

OSN-SLiteraturaOSN-E

Tyrey, l.: Human chorinonic gonadotropin: Properties and assay methods. Seminars in Oncol., 22, 1995, 121-129.

Kaušitz, J.: Rádioimunoanalýza v onkológii. LF UK Plzeò, 1995.

Masopust, J.: Klinická biochemie. Požadování a hodnocení biochemických vyšetøení. Karolinum, Praha, 1998.

Encyklopedie laboratorní diagnostiky pro klinickou praxi http://www.enclabmed.cz